Antibodi terhadap Hepatitis B Virus Core Antigen (HBcAb)

ELISA TadalahKitu

Untuk penggunaan diagnostik in vitro dan profesional saja.

Nama produk

Kit pengujian ELISA anti-HBc (Serum/Plasma)

Penggunaan yang dimaksudkan

Kit uji anti-HBc ELISA ini adalah deteksi kualitatif antibodi terhadap antigen inti virus hepatitis B (HBcAb) dalam serum/plasma manusia.Reagen ini cocok untuk skrining klinis dan diagnosis infeksi virus hepatitis B dalam serum/plasma manusia.

Prinsip Uji

Virus hepatitis B (HBV) adalah amplop,virus DNA berantai ganda milik keluarga Hepadnaviridae dan diakui sebagai penyebab utama hepatitis menular melalui darah bersama dengan virus hepatitis C (HCV)Infeksi dengan HBV memicu spektrum manifestasi klinis mulai dari penyakit ringan, tidak terlihat hingga hepatitis fulminate, penyakit hati kronis yang parah,yang dalam beberapa kasus dapat menyebabkan sirosis dan kanker hatiKlasifikasi infeksi hepatitis B membutuhkan identifikasi beberapa penanda serologis yang diekspresikan selama tiga fase (inkubasi, akut dan konvalesen) infeksi.

Komponen utama virus adalah Hepatitis B core antigen (HBcAg).Antigen inti ini terdiri dari polipeptida tunggal sekitar 17kD yang dilepaskan saat partikel inti teruraiSetidaknya satu penentu imunologis hadir dalam antigen.

Tidak lama setelah timbulnya HBsAg, antibodi terhadap HBcAg (antibodi total anti-HBc dan IgM) muncul dan tidak pernah hilang.a Infeksi hepatitis B dapat tertular tanpa anti-HBc yang terdeteksi secara imunologis. Ini biasanya ditemukan pada pasien yang imunosupres. skrining untuk anti-HBc menghasilkan data tentang prevalensi hepatitis B di berbagai populasi.kronis, atau infeksi HBV yang hilang. Identifikasi anti-HBc sangat penting ketika didiagnosis dalam pengaturan klinis.penanda anti-HBc memungkinkan diagnosis yang benar dan pemantauan perkembangan virus yang tepatAnti-HBc mungkin satu-satunya indikator infeksi hepatitis B (termasuk tes lain pada pasien HBsAg negatif).

Sistem pengujian HBcAb ELISA didasarkan pada prinsip fase padat, satu langkah inkubasi kompetitif.Ini bersaing dengan anti-HBc monoklonal yang dikonjugasi ke peroksidase lobak (HRP-Conjugate) untuk jumlah tetap HBcAg murni yang sudah dilapisi di microplateJika anti-HBc tidak ada, anti-HBc HRP-konjugasi akan terikat bersama dengan antigen di dalam sumur.Setelah larutan kromogen A dan B ditambahkan ke dalam sumur dan selama inkubasi, produk berwarna biru muncul. Setelah reaksi dihentikan dengan asam sulfat, warna biru berubah menjadi kuning. Kehadiran antibodi terhadap HBcAg dalam sampel ditunjukkan oleh warna rendah,atau tidak ada warna sama sekali.

Persyaratan Sampel

1.Pengumpulan spesimen:Tidak diperlukan persiapan khusus pasien. Pengambilan sampel sesuai dengan praktik laboratorium normal. Sampel serum/plasma segar dapat digunakan dengan tes ini.Darah yang dikumpulkan dengan pembedahan vena harus dibiarkan beku secara alami dan sepenuhnya ¢ serum harus dipisahkan dari beku sedini mungkin untuk menghindari hemolitik sel darah merahPerhatian harus diambil untuk memastikan bahwa sampel serum/plasma jelas dan tidak terkontaminasi oleh mikroorganisme.

2.HSampel yang sangat lipaemic, ikterik, atau hemolitik tidak harus digunakankarena mereka bisa memberikan hasil yang salah dalam tes.Jangan panas inaktivasi spesimenSampel dengan kontaminasi mikroba yang terlihat tidak boleh digunakan.

3. HBcAb ELISA hanya dimaksudkan untuk pengujian sampel serum/plasma individu. Jangan gunakan tes untuk pengujian sampel mayat, air liur, urin atau cairan tubuh lainnya, atau darah yang dikumpulkan (campur).

4Pengangkutan dan Penyimpanan: Simpan sampel pada suhu 2-8°C. Sampel yang tidak diperlukan untuk analisis dalam waktu 3 hari harus disimpan beku (-20°C atau lebih rendah).Untuk pengiriman, sampel harus dikemas dan diberi label sesuai dengan peraturan lokal dan internasional yang berlaku untuk transportasi sampel klinis dan agen etologis.

Prosedur pengujian

1Semua reagen harus dibiarkan mencapai suhu kamar selama 15 menit sebelum digunakan.

2. encerkan penyangga cuci dengan kecepatan 1: 40 dengan air suling sebelum digunakan.

3Sampel harus sesuai dengan jumlah microplate, setiap plate harus dilengkapi dengan kontrol negatif 3 lubang, kontrol positif 2 lubang dan kontrol kosong 1 lubang.(Jika dideteksi dengan deteksi panjang gelombang ganda, pengaturan tidak ada lubang kontrol kosong diizinkan).

Catatan: Gunakan ujung pipet pembuangan yang terpisah untuk setiap sampel, Kontrol Negatif dan Positif untuk menghindari kontaminasi silang.

4Tambahkan sampel 50μL ke dalam sumur yang sesuai (Ketika kit ini digunakan untuk diagnosis klinis tambahan, sampel yang akan diuji harus diencerkan dengan larutan garam normal pada 1:30 untuk pengujian.Ketika digunakan untuk penelitian epidemiologis, sampel asli dapat dideteksi ), tambahkan 50μL kontrol negatif dan kontrol positif ke sumur kontrol negatif dan sumur kontrol positif.Dengan menambahkan Enzyme Conjugate 50μL (Jangan tambahkan dalam sumur kosong).

5. goyang selama 30 detik dengan osilator (Langkah ini sangat penting). incubate pada 37 °C selama 30 menit dengan membran pelat penyegelan menyegel pelat.

6. Pada akhir inkubasi, lepaskan dan buang tutup piring. Keluarkan, tambahkan penyangga cuci ke setiap sumur selama 20 detik. Ulangi 5 kali. Setelah siklus cuci terakhir,putar piring ke atas kertas atau handuk bersih, dan ketuk untuk menghapus sisa.

7. Tambahkan Substrat A (50μL) dan Substrat B (50μL) (Jangan tambahkan ke dalam sumur kosong). Campurkan dengan lembut dengan mengguncang. Inkubasi pada 37 °C selama 15 menit dengan membran pelat penyegelan menyegel pelat.

8Tambahkan 50μL Stop Solution ke setiap sumur (Jangan tambahkan ke dalam sumur kosong).Kalibrasi pembaca plat dengan Blank baik dan membaca penyerapan pada 450nm.Jika alat filter ganda digunakan, atur panjang gelombang referensi pada 630nm. Tidak ada lubang kosong yang diizinkan jika menggunakan panjang gelombang ganda untuk mendeteksi. Hitung nilai Cut-off dan evaluasi hasilnya.