Human Anti HIV 1&2 Elisa Test Kit Untuk Human Immunodeficiency Virus

3. PROSEDUR PEMERIKSAAN

• Biarkan semua komponen mencapai suhu kamar sebelum digunakan.Encerkan buffer pencuci pekat 1:20 dengan ddH2O.
• Tetapkan dua kontrol positif dan tiga kontrol negatif.Buang 100μl Kontrol Positif (HIV-1 dan HIV-2) serta Kontrol Negatif dalam rangkap dua ke masing-masing sumur tanpa pengencer sampel.Atur satu sumur kosong sebagai kontrol latar belakang tanpa menambahkan cairan apa pun.Tambahkan 50 l pengencer sampel ke dalam setiap sumur uji, tambahkan 50 l serum atau plasma uji ke dalam sumur uji, aduk rata.
• Tempatkan pelat mikrotiter ke dalam kotak yang dilembabkan dan inkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit.
• Buang larutan reaksi dan tambahkan 350μl buffer pencuci yang diencerkan ke setiap sumur.Buang buffer pencuci setelah direndam selama 15-30 detik.Ulangi prosedur pencucian 5 kali dan kemudian balikkan pelat dengan kuat untuk mengeluarkan semua air dan menutup tepi lubang pada kertas penyerap selama beberapa detik.
• Tambahkan 100μl Enzyme Conjugate ke masing-masing well.Campurkan perlahan dengan memutar pelat mikrotiter di atas bangku datar selama 1 menit.Jangan menambahkan Enzim Konjugasi ke sumur kosong..
• Tempatkan pelat mikrotiter ke dalam kotak yang dilembabkan dan inkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit.
• Cuci setiap sumur 5 kali dengan mengisi setiap sumur dengan buffer pencuci 1X yang diencerkan, lalu balikkan pelat dengan kuat untuk mengeluarkan semua air dan tutup tepi sumur di atas kertas penyerap selama beberapa detik.
• Tambahkan 50μl Larutan Substrat A (substrat HRP) ke setiap sumur, lalu tambahkan 50μl Larutan Substrat B (TMB) ke setiap sumur.Campur perlahan dan inkubasi pada suhu 37°C selama 15 menit.
• Tambahkan satu tetes (50μl) Stop Solution ke setiap sumur untuk menghentikan reaksi warna.
• Baca nilai OD pada 450 nm/630 nm dengan pembaca pelat filter ganda.Ini adalah pilihan untuk membaca nilai OD pada 450 nm dengan pembaca pelat filter tunggal.(menggunakan nilai OD dari sumur kosong untuk mengoreksi semua pembacaan OD dari semua sumur