VCAM-1 RUO Elisa Kit Human Vascular Endothelial Cell Adhesion Molekul 1

Deskripsi produk:

Tujuan

Kit ini memungkinkan untuk menentukan konsentrasi VCAM-1 dalam serum manusia, supernat sel kultur dan cairan biologis lainnya

Prinsip tes

Kit tes tingkat VCAM-1 manusia dalam sampel, menggunakan antibodi VCAM-1 manusia yang dimurnikan untuk melapisi sumur plat mikrotiter, membuat antibodi fase padat, kemudian tambahkan VCAM-1 ke sumur,Antibodi VCAM-1 yang dikombinasikan dengan HRP, menjadi kompleks antibodi-antigen-enzim-antibodi, setelah mencuci sepenuhnya, Tambahkan larutan TMB substrat, TMB substrat menjadi warna biru Pada HRP enzim-katalisis,reaksi diakhiri dengan penambahan larutan asam sulfat dan perubahan warna diukur spektrophotometrically pada panjang gelombang 450 nmKonsentrasi VCAM-1 manusia dalam sampel kemudian ditentukan dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.

Bahan yang disertakan dengan kit

Parameter teknis:

Persyaratan sampel

• ekstrak secepat mungkin setelah pengambilan spesimen,dan sesuai dengan literatur yang relevan,dan harus dilakukan percobaan secepat mungkin setelah ekstraksi.sampel dapat disimpan pada -20 °C untuk melestarikanHindari siklus pembekuan dan pencairan berulang.
• Tidak dapat mendeteksi sampel yang mengandung NaN3, karena NaN3 menghambat HRP aktif.

Prosedur penilaian

• Mencairkan dan tambahkan sampel:Mencairkan standar kepadatan asli seperti dalam tabel berikut:

2. Tambahkan sampel: Setel sumur kosong secara terpisah (sumur perbandingan kosong tidak menambahkan sampel dan HRP-Conjugate reagen, lain setiap langkah operasi adalah sama).Tambahkan 50μl standar ke Microelisa stripplate, tambahkan sampel pengencer 40μl untuk sampel pengujian sumur, kemudian tambahkan sampel pengujian 10μl (sampel pengencer akhir adalah 5 kali lipat), tambahkan sampel ke sumur, jangan menyentuh dinding sumur sejauh mungkin, dan campuran lembut.

3Inkubasi: Setelah menutup plat dengan membran plat penutupan, inkubasi selama 30 menit pada 37°C.

4. Konfigurasikan cairan: larutan cuci 30 (atau 20) kali, diencerkan 30 (atau 20) kali dengan air suling dan cadangan.

5. Cuci: Buka membran pelat penutupan, buang Cairan, kering dengan ayunan, tambahkan pencuci buffer ke setiap sumur, tetap selama 30s kemudian mengalirkan, ulangi 5 kali, kering dengan ketukan.

6Tambahkan enzim: Tambahkan reagen HRP-Conjugate 50μl ke setiap sumur, kecuali sumur kosong.

7Operasi dengan 3.

8Operasi dengan 5.

9. Warna: Tambahkan larutan kromosom A 50ul dan larutan kromosom B 50ul ke setiap sumur, hindari pengawetan cahaya selama 10 menit pada 37°C

10. Hentikan reaksi: Tambahkan Stop Solution50μl ke setiap sumur, Hentikan reaksi ((warna biru berubah menjadi warna kuning).

11. Uji: mengambil kosong baik sebagai nol, Membaca penyerapan pada 450nm setelah Menambahkan Stop Solusi dan dalam waktu 15 menit

Perhitungkan:

Ambil kepadatan standar sebagai horizontal, nilai OD untuk vertikal, menggambar kurva standar pada kertas grafik,Cari kepadatan yang sesuai dengan nilai sampel OD oleh kurva sampel, dikalikan dengan kelipatan pengenceran, atau hitung persamaan regresi garis lurus kurva standar dengan kepadatan standar dan nilai OD, dengan nilai OD sampel dalam persamaan,menghitung kepadatan sampel, dikalikan dengan faktor pengencer, hasilnya adalah kepadatan sampel yang sebenarnya.