BIOVANTION Anti Thyroglobulin Antibody Test Kit Tes Anti Tg Ab

KIT TEST ELISA Anti-Tg Tiroglobulin Ab

1. Tujuan penggunaan

Immunoassay untuk penentuan kuantitatif in vitro antibodi terhadap tiroglobulin dalam serum manusia.Penentuan anti-Tg digunakan sebagai bantuan dalam mendeteksi penyakit tiroid autoimun.

2. Ringkasan

Tiroglobulin (Tg) diproduksi di kelenjar tiroid dan merupakan komponen utama dalam lumen folikel tiroid.Bersinergi dengan enzim peroksidase spesifik tiroid (TPO), Tg memiliki fungsi penting dalam iodinasi L-tirosin dan dalam pembentukan hormon tiroid T4 dan T3.Baik Tg dan TPO berpotensi autoantigen.

Peningkatan konsentrasi serum antibodi terhadap Tg (Tg-autoantibodi) ditemukan pada subjek dengan tiroiditis berbasis autoimunitas.Konsentrasi tinggi anti-Tg bersama dengan anti-TPO merupakan indikasi tiroiditis limfositik-infiltratif kronis (penyakit Hashimoto).Frekuensi antibodi tiroglobulin adalah sekitar 70-80% pada subjek dengan tiroiditis autoimun, termasuk penyakit Hashimoto, dan sekitar 30% pada individu dengan penyakit Graves. Uji anti-Tg penting untuk digunakan dalam memantau perjalanan tiroiditis Hashimoto dan untuk diagnosis banding (kasus dugaan tiroiditis autoimun yang tidak diketahui asalnya dengan hasil tes anti-TPO negatif, penyakit Graves tanpa infiltrasi limfosit, dan untuk menyingkirkan gangguan oleh Tg-autoantibodi dalam tes Tg).

Meskipun sensitivitas prosedur dapat ditingkatkan dengan secara bersamaan menentukan antibodi tiroid tambahan (anti-TPO, reseptor-antibodi TSH), hasil negatif tidak secara definitif mengesampingkan adanya penyakit autoimun.Tingkat titer antibodi tidak berkorelasi dengan aktivitas klinis penyakit.Titer yang meningkat pada awalnya dapat menjadi negatif jika penyakit berlanjut untuk jangka waktu yang lebih lama atau jika:

remisi terjadi.Jika antibodi muncul kembali setelah remisi, kemungkinan kambuh.

Uji imunosorben terkait enzim menggunakan antigen manusia dan antibodi IgG antimanusia kelinci (anti-IgG).

3. Bahan Reagen disediakan

• Microplate dilapisi, 8 x 12 strip, 96 sumur.Pra-dilapisi dengan antigen TG manusia.

• Kalibrator, 6 vial, masing-masing 1 mL, siap pakai;Konsentrasi: 0(A), 50(B), 150(C), 500(D), 1000(E) dan 2000(F) IU/mL.

• Enzyme Conjugate, 1 vial, 11,0 mL HRP (horseradish peroxidase) berlabel antibodi IgG anti-manusia kelinci (anti-IgG) kelinci dalam buffer Tris-NaCl yang mengandung BSA (bovine serum albumin).Mengandung 0,1% ProClin300 pengawet.

• Pengencer Serum: 1 botol, 11mL.Mengandung garam penyangga dan pewarna

• Wash Solution Concentrate, 1 vial, 25 ml (40X pekat), PBS-Tween wash solution.

• Substrat, 1 vial, 11ml, siap pakai, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Stop Solution, 1 vial, 6,0 ml 1 mol/l asam sulfat.

• IF, 1 eksemplar.

• Tutup Piring: 2 buah.

4. Bahan yang dibutuhkan (tetapi tidak disediakan)

• Pembaca pelat mikro dengan kemampuan penyerap panjang gelombang 450nm dan 620nm.
• Mesin cuci piring mikro.
• Inkubator.
• Pengocok piring.
• Mikropipet dan mikropipet multisaluran menghasilkan 50µl dengan presisi lebih baik dari 1,5%.
• Kertas penyerap.
• Air sulingan

5. Prosedur pengujian

• Gunakan hanya jumlah sumur yang diperlukan dan format sumur pelat mikro untuk setiap kalibrator dan sampel yang akan diuji.

• Tambahkan 100 L kalibrator ke setiap sumur.

• Tambahkan 100 L Sample Diluent (Warna hijau) ke masing-masing sumur Kecuali Kalibrator-sumur.

• Tambahkan 10 L Sample ke masing-masing Sample Diluent well (CATATAN: Reagen di Wells akan berubah warna menjadi Biru dari Hijau), lalu kocok selama 30 detik.

• Tutup piring dengan tutup piring dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 menit.

• Buang isi piring mikro dengan dekantasi atau aspirasi.Jika menuang, ketuk dan keringkan pelat dengan kertas penyerap.

• Tambahkan 350 L larutan pencuci, tuang (ketuk dan blot) atau aspirasi.Ulangi 4 kali tambahan untuk total 5 kali pencucian.Di akhir pencucian, balikkan piring dan tepuk sisa larutan pencuci ke kertas penyerap.

• Tambahkan 100 L enzim konjugat,

• Tutup piring dengan tutup piring dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 menit

• Tambahkan 350 L larutan pencuci, tuang (ketuk dan blot) atau aspirasi.Ulangi 4 kali tambahan untuk total 5 kali pencucian.Di akhir pencucian, balikkan piring dan tepuk sisa larutan pencuci ke kertas penyerap.

• Tambahkan 100 L Substrat ke setiap sumur.Tutup dan inkubasi pada suhu sekitar (18-25 ) dalam gelap untuk reaksi selama 10 menit.Jangan goyangkan pelat setelah penambahan substrat.

• Tambahkan 50 L stop solution ke setiap sumur.

• Kocok selama 15-20 detik untuk mencampur cairan di dalam sumur.Penting untuk memastikan bahwa warna biru berubah menjadi kuning sepenuhnya.

• Baca absorbansi masing-masing sumur pada 450 nm (menggunakan 620 hingga 630 nm sebagai panjang gelombang referensi untuk meminimalkan ketidaksempurnaan sumur) dalam pembaca pelat mikro.Hasilnya harus dibaca dalam waktu 30 menit setelah menambahkan stop solution.