Mouse E Cad E Cadherin Elisa Kit Penelitian Hanya Menggunakan Metode Sandwich

Mouse E-Cadherin,E-Cad ELISA Kit

Kit ELISA ini menggunakan Sandwich-ELISA sebagai metodenya.Stripplate Microelisa yang disediakan dalam kit ini telah dilapisi sebelumnya dengan antibodi khusus untuk E-Cad.Standar atau sampel ditambahkan ke sumur stripplate Microelisa yang sesuai dan digabungkan ke antibodi spesifik.Kemudian sebuah antibodi terkonjugasi Horseradish Peroxidase (HRP) spesifik untuk E-Cad ditambahkan ke masing-masing stripplate Microelisa dan diinkubasi.Komponen gratis tersapu.Larutan substrat TMB ditambahkan ke setiap sumur.Hanya sumur yang mengandung antibodi E-Cad terkonjugasi E-Cad dan HRP yang akan tampak berwarna biru dan kemudian berubah menjadi kuning setelah penambahan stop solution.Densitas optik (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 nm.Nilai OD sebanding dengan konsentrasi E-Cad.Anda dapat menghitung konsentrasi E-Cad dalam sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.

Bahan disediakan dengan kit

Prosedur

Pengenceran Standar

1.Sepuluh sumur ditetapkan untuk standar dalam pelat strip Microelisa.Di Sumur 1 dan Sumur 2, 100μl Larutan standar dan 50l buffer Pengenceran Standar ditambahkan dan dicampur dengan baik.Di Sumur 3 dan Sumur 4, masing-masing 100μl larutan dari Sumur 1 dan Sumur 2 ditambahkan.Kemudian ditambahkan 50μl Standard Dilution buffer dan diaduk rata.50μl larutan dibuang dari Sumur 3 dan Sumur 4. Di Sumur 5 dan Sumur 6, masing-masing 50μl larutan dari Sumur 3 dan Sumur 4 ditambahkan.Kemudian ditambahkan 50μl Standard Dilution buffer dan diaduk rata.Di Sumur 7 dan Sumur 8, masing-masing 50μl larutan dari Sumur 5 dan Sumur 6 ditambahkan.Kemudian ditambahkan 50μl Standard Dilution buffer dan diaduk rata.Di Sumur 9 dan Sumur 10, masing-masing 50μl larutan dari Sumur 7 dan Sumur 8 ditambahkan.Kemudian ditambahkan 50μl Standard Dilution buffer dan diaduk rata.50μl larutan dibuang dari Sumur 9 dan Sumur 10. Setelah pengenceran, total volume di semua sumur adalah 50μl dan konsentrasi masing-masing adalah 24ng/ml,16 ng/ml,8 ng/ml,4ng/ml dan 2ng/ml .

2. Di pelat strip Microelisa, biarkan sumur kosong sebagai kontrol kosong.Di sumur sampel, ditambahkan 40μl Sample dilution buffer dan 10μl sample (faktor pengenceran adalah 5).Sampel harus dimuat ke bagian bawah tanpa menyentuh dinding sumur.Aduk rata dengan pengocokan lembut.

3. Inkubasi: inkubasi 30 menit pada suhu 37 setelah disegel dengan membran pelat Penutupan.

4. Pengenceran: encerkan buffer pencuci pekat dengan air suling (30 kali untuk 96T dan 20 kali untuk 48T).

5. Pencucian: lepaskan dengan hati-hati membran pelat penutup, hisap dan isi ulang dengan larutan pencuci.Buang larutan pencuci setelah beristirahat selama 30 detik.Ulangi prosedur pencucian selama 5 kali.

6. Tambahkan 50 l reagen HRP-Conjugate ke masing-masing well kecuali blanko kontrol.

7. Inkubasi seperti yang dijelaskan pada Langkah 3.

8. Mencuci seperti yang dijelaskan pada Langkah 5.

9. Pewarnaan: Tambahkan 50 l Chromogen Solution A dan 50 l Chromogen Solution B ke masing-masing well, campur dengan pengocokan perlahan dan inkubasi pada suhu 37℃ selama 15 menit.Harap hindari cahaya saat mewarnai.

10. Terminasi: tambahkan 50 l stop solution ke setiap sumur untuk menghentikan reaksi.Warna di dalam sumur harus berubah dari biru menjadi kuning.

11. Baca absorbansi OD pada 450nm menggunakan Microtiter Plate Reader.Nilai OD dari sumur kontrol kosong ditetapkan sebagai nol.Pengujian harus dilakukan dalam waktu 15 menit setelah menambahkan larutan penghenti.

presisi

Intra-assay Precision (Precision in a assay): 3 sampel dengan E-Cad tingkat rendah, menengah dan tinggi diuji masing-masing 20 kali pada satu pelat.

Inter-assay Precision (Precision between assays): 3 sampel dengan E-Cad tingkat rendah, menengah dan tinggi diuji pada 3 pelat berbeda, 8 ulangan di setiap pelat.

CV(%) = SD/rata-rataX100

Intra-Assay: CV<10%

Inter-Assay: CV<12%

Rentang pengujian

0.6pg/ml -80pg/ml

Kepekaan:

0,1 pg/ml