Human Trx Thioredoxin ELISA Thioredoxin Assay Kit RUO Test Kit

Thioredoxin Manusia, Trx ELISA Kit

Thioredoxin Manusia, Trx ELISA Kit

Bahan disediakan dengan kit

Prosedur

Pengenceran Standar

1.Sepuluh sumur ditetapkan untuk standar dalam pelat strip Microelisa.Di Sumur 1 dan Sumur 2, 100μl Larutan standar dan 50l buffer Pengenceran Standar ditambahkan dan dicampur dengan baik.Di Sumur 3 dan Sumur 4, masing-masing 100μl larutan dari Sumur 1 dan Sumur 2 ditambahkan.Kemudian ditambahkan 50μl Standard Dilution buffer dan diaduk rata.50μl larutan dibuang dari Sumur 3 dan Sumur 4. Di Sumur 5 dan Sumur 6, masing-masing 50μl larutan dari Sumur 3 dan Sumur 4 ditambahkan.Kemudian ditambahkan 50μl Standard Dilution buffer dan diaduk rata.Di Sumur 7 dan Sumur 8, masing-masing 50μl larutan dari Sumur 5 dan Sumur 6 ditambahkan.Kemudian ditambahkan 50μl Standard Dilution buffer dan diaduk rata.Di Sumur 9 dan Sumur 10, masing-masing 50μl larutan dari Sumur 7 dan Sumur 8 ditambahkan.Kemudian ditambahkan 50μl Standard Dilution buffer dan diaduk rata.50μl larutan dibuang dari Sumur 9 dan Sumur 10. Setelah pengenceran, total volume di semua sumur adalah 50μl dan konsentrasinya adalah 3600 pg/ml, 2400pg/ml, 1200 pg/ml, 600pg/ml dan 300 pg/ml, masing-masing.

2. Di pelat strip Microelisa, biarkan sumur kosong sebagai kontrol kosong.Di sumur sampel, ditambahkan 40μl Sample dilution buffer dan 10μl sample (faktor pengenceran adalah 5).Sampel harus dimuat ke bagian bawah tanpa menyentuh dinding sumur.Aduk rata dengan pengocokan lembut.

3. Inkubasi: inkubasi 30 menit pada suhu 37 setelah disegel dengan membran pelat Penutupan.

4. Pengenceran: encerkan buffer pencuci pekat dengan air suling (30 kali untuk 96T dan 20 kali untuk 48T).

5. Pencucian: lepaskan dengan hati-hati membran pelat penutup, hisap dan isi ulang dengan larutan pencuci.Buang larutan pencuci setelah beristirahat selama 30 detik.Ulangi prosedur pencucian selama 5 kali.

6. Tambahkan 50 l reagen HRP-Conjugate ke masing-masing well kecuali blanko kontrol.

7. Inkubasi seperti yang dijelaskan pada Langkah 3.

8. Mencuci seperti yang dijelaskan pada Langkah 5.

9. Pewarnaan: Tambahkan 50 l Chromogen Solution A dan 50 l Chromogen Solution B ke masing-masing well, campur dengan pengocokan perlahan dan inkubasi pada suhu 37℃ selama 15 menit.Harap hindari cahaya saat mewarnai.

10. Terminasi: tambahkan 50 l stop solution ke setiap sumur untuk menghentikan reaksi.Warna di dalam sumur harus berubah dari biru menjadi kuning.

11. Baca absorbansi OD pada 450nm menggunakan Microtiter Plate Reader.Nilai OD dari sumur kontrol kosong ditetapkan sebagai nol.Pengujian harus dilakukan dalam waktu 15 menit setelah menambahkan larutan penghenti.