MPXV PCR Monkeypox Virus Deteksi PCR Multiplex Real-Time yang Dingin beku

Prosedur Operasi

1) Ekstraksi asam nukleat Ekstraksi DNA dari spesimen menggunakan kit ekstraksi yang tepat.Dianjurkan agar asam nukleat dieluasi dengan sekitar 100 μl buffer eluasi (TE atau H2O bebas nuklease) pada langkah akhir ekstraksi.Asam nukleat yang dimurnikan harus segera digunakan atau disimpan pada suhu -20°C.

2) Persiapan Kontrol Positif Kontrol positif dapat disimpan pada suhu sekitar sebelum rehidrasi hingga 12 bulan.Ini harus rehidrasi sebelum digunakan dengan menambahkan 250 μl buffer TE atau H2O bebas nuklease, berputar pada kecepatan rendah selama 15-20 detik, dan sentrifugal pada kecepatan rendah selama 15-20 detik.

3) Persiapan campuran RT-PCR Real-Time

A) Buka bungkus vakum dan keluarkan strip 8 tabung yang berisi reagen. periksa pelet berada di bagian bawah tabung (potong jumlah tabung yang diperlukan jika diperlukan).Jika tabung yang disediakan tidak kompatibel dengan instrumen Anda, pindahkan pelet reagen ke tabung optik yang kompatibel dengan instrumen Anda.

B) Buka tabung dan buang tutup (tidak cocok untuk mesin PCR real-time), dan persiapkan campuran reaksi pada es seperti di bawah ini

* Air bebas nuklease dapat digunakan sebagai kontrol negatif.

C) Tutup tabung dengan tutup optik atau 96-well plat dengan film segel optik (tidak disediakan).

D) Vortex tabung pada kecepatan rendah selama 10 ~ 15 detik, dan sentrifugasi pada 3000rpm selama 20 detik dan menempatkan mereka dalam instrumen PCR real-time.

3) Pengaturan RT-PCR: Atur volume reaksi menjadi 25μl, dan prosedur amplifikasi PCR seperti di bawah ini.Fluoresensi ROX (untuk Orf1ab) dan CY5 (untuk gen RNase P) pada 60°C, dan pilih NONE sebagai referensi pasif.
4) Analisis dan Interpretasi Hasil Tentukan garis ambang sesuai dengan instruksi instrumen.

A) Kontrol Kualitas:

B) Interpretasi Hasil Sampel

Parameter teknis: